圓二色光譜儀的工作原理是:利用蛋白質(zhì)的圓二色性及不對稱(chēng)分子對左右圓偏振光吸收的不同來(lái)進(jìn)行結構分析。蛋白質(zhì)或多肽中主要的光活性基團是肽鍵、芳香氨基酸殘基及二硫鍵等,當平面圓偏振光的吸收不相同時(shí),會(huì )產(chǎn)生吸收差值。由于這種吸收差的存在,造成了偏振光矢量的振幅差,圓偏振光變成了橢圓偏振光,即蛋白質(zhì)的圓二色性。通過(guò)圓二色譜掃描儀,可以在一定程度上分析蛋白質(zhì)、多肽樣品的二級結構和高級結構。
要測到準確的蛋白質(zhì)CD譜,要同時(shí)看一看吸收譜,吸收值最好在0.5-2.0之間,這是最主要的參照標準,對濃度沒(méi)有必然的規定,常見(jiàn)的經(jīng)驗值為濃度在0.1-1.0 mg/ml 之間, 也可以更低或更高。
技術(shù)指標
圓二色譜分析的供試品,大多數情況下的蛋白質(zhì)和多肽。蛋白質(zhì)的精確濃度是計算樣品二級結構的關(guān)鍵,一般要求樣品濃度為0.2μg/μl,濃度過(guò)高,測試時(shí)信號不好,需稀釋?zhuān)瑯悠芳兌纫?0%以上,不要添加任何保護劑或其它物質(zhì),樣品中應避免含有光吸收的雜質(zhì),緩沖劑和溶劑在配制溶液前最好做單獨的檢查,透明性極好的磷酸鹽可用作緩沖體系。
大連華洋分析儀器有限公司主營(yíng)電化學(xué)工作站,微區掃描電化學(xué)工作站,多通道電化學(xué)工作站,作為較早將圓二色光譜技術(shù)引進(jìn)國內的公司,華洋科儀始終以科學(xué),嚴謹,專(zhuān)業(yè),領(lǐng)先的形象得到國內外廠(chǎng)商以及客戶(hù)的大力支持與信賴(lài)
圓二色譜在遠紫外區的掃描圖譜,反映的是蛋白質(zhì)肽鍵的排布信息,計算所得的是蛋白質(zhì)二級結構比例,即α-螺旋、β-折疊、轉角和不規則卷曲的比例。
圓二色譜在近紫外區的掃描圖譜,反映的是蛋白質(zhì)側鏈生色基團色氨酸、苯丙氨酸、酪氨酸等殘基的排布信息和二硫鍵微環(huán)境的變化。