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CD圓二色光譜儀
  • 發(fā)布時(shí)間 : 2023-05-31 14:01:32
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圓二色光譜儀

圓二色光譜(簡(jiǎn)稱(chēng)CD)是應用最為廣泛的測定蛋白質(zhì)二級結構的方法,是研究稀溶液中蛋白質(zhì)構象的一種快速、簡(jiǎn)單、較準確的方法。它可以在溶液狀態(tài)下測定,較接近其生理狀態(tài)。而且測定方法快速簡(jiǎn)便,對構象變化靈敏,所以它是目前研究蛋白質(zhì)二級結構的主要手段之一,并已廣泛應用于蛋白質(zhì)的構象研究中。



用于推斷非對稱(chēng)分子的構型和構象的一種旋光光譜。光學(xué)活性物質(zhì)對組成平面偏振光的左旋和右旋圓偏振光的吸收系數(ε)是不相等的,εL≠εR,即具有圓二色性。如果以不同波長(cháng)的平面偏振光的波長(cháng)λ為橫坐標,以吸收系數之差Δε=εL-εR為縱坐標作圖,得到的圖譜即是圓二色光譜,簡(jiǎn)稱(chēng)CD。


如果某手性化合物在紫外可見(jiàn)區域有吸收,就可以得到具有特征的圓二色光譜。由于εL≠εR,透射光不再是平面偏振光,而是橢圓偏振光,摩爾橢圓度[θ]與Δε的關(guān)系為:[θ]=3300Δε。圓二色譜也可以摩爾橢圓度為縱坐標,以波長(cháng)為橫坐標作圖。由于△ε有正值和負值之分,所以圓二色譜也有呈峰的正性圓二色譜和呈谷的負性圓二色譜。在紫外可見(jiàn)光區域測定圓二色譜與旋光譜,其目的是推斷有機化合物的構型和構象。

樣品要求

1. 樣品必須保持一定的純度不含光吸收的雜質(zhì),溶劑必須在測定波長(cháng)沒(méi)有吸收干擾;樣品能完全溶解在溶劑中, 形成均一透明的溶液。

2. 氮氣流量的控制

3. 緩沖液、溶劑要求與池子選擇:緩沖液和溶劑在配制溶液前要做單獨的檢查,看是否在測定波長(cháng)范圍內有吸收干擾,看是否形成沉淀和膠狀;在蛋白質(zhì)測量中,經(jīng)常選擇透明性極好的磷酸鹽作為緩沖體系。

4. 樣品濃度與池子選擇

樣品不同,測定的圓二色光譜范圍不同,對池子大小(光徑)的選擇和濃度的要求也不一樣。蛋白質(zhì)CD光譜測量一般在相對較稀的溶液中進(jìn)行。

原理

圓二色光譜采用特性少高効率的28度入射角干涉儀、集光効率高的光學(xué)系、排除雙折射元件的反射光學(xué)系,高精度控制光軸,通過(guò)控制偽影和經(jīng)時(shí)變化使裝置始終保持佳狀態(tài)。圓二色光譜由適合VCD的演算法的DSP鎖定檢測功能、實(shí)現了信噪比的大幅度改善,通過(guò)使用只透過(guò)VCD光譜測量目標吸收帶的窄帶濾光片,可以測得現有方法測不到的微小波峰。

根據圓二色光譜法的原理和測試要求設計制成的儀器稱(chēng)為圓二色光譜儀。目前圓二色光譜法及其儀器已廣泛應用于有機化學(xué)、生物化學(xué)、配位化學(xué)和藥物化學(xué)等領(lǐng)域,成為研究有機化合物的立體構型的一個(gè)重要方法。   

使用圓二色光譜相關(guān)儀器時(shí)需要注意以下幾點(diǎn)要求

1. 儀器發(fā)生故障時(shí)應及時(shí)報告技術(shù)人員處理.儀器發(fā)生異?,F象時(shí),馬上關(guān)閉電源,保護現場(chǎng)并及時(shí)上報。

2. 不亂按鍵盤(pán),操作人員不得進(jìn)入操作規程規定以外的任何程序,不得按規定以外的任何功能鍵.卸下火花臺板時(shí)要輕拿輕放,防止內表面劃傷.取出火花室內圓石英墊片和玻璃套管時(shí)務(wù)必謹慎小心,防止操作不當致其破碎。

3. 壓樣品夾子要垂直,不得在未夾好樣品時(shí)按激發(fā)鍵,不得在激發(fā)時(shí)觸摸或抬起樣品夾.如果遇到激發(fā)時(shí)聲音很大,應該按F3鍵停止,不允許直接抬起樣品夾,否則易造成電路板燒毀。

4. 激發(fā)樣品后在火花臺內產(chǎn)生黑色沉積物可導致電極與火花臺之間短路,所以火花臺應定期清理。

5. 非崗位人員不得隨便進(jìn)入機房,機房?jì)冉刮鼰?,吃食物?

6. 如果遇到突然斷電時(shí),應先關(guān)總,再將其它電源關(guān)閉,等到來(lái)電后,按規程條款進(jìn)行開(kāi)機操作。


1. 雙光源設計帶來(lái)無(wú)可比擬的信噪比,技術(shù)可升級,可使在測量固體樣品時(shí)消除固體樣品本身的誤差,同時(shí)采集紅外光譜和振動(dòng)圓二色光譜。圓二色光譜數字信號處理,而無(wú)需鎖定或者電子濾波,獨立的紅外光源接口、PEM的恒溫對應可以獲得沒(méi)有經(jīng)時(shí)變化的基線(xiàn)。

2. 采用特性少高効率的28度入射角干涉儀、集光効率高的光學(xué)系、排除雙折射元件的反射光學(xué)系,高精度控制光軸,通過(guò)控制偽影和經(jīng)時(shí)變化使裝置始終保持zui佳狀態(tài)。圓二色光譜由適合VCD的演算法的DSP鎖定檢測功能、實(shí)現了信噪比的大幅度改善,通過(guò)使用只透過(guò)VCD光譜測量目標吸收帶的窄帶濾光片,可以測得現有方法測不到的微小波峰。

3. 光學(xué)系、樣品室、檢測器都可以進(jìn)行吹掃、可不受大氣的影響穩定測量,一機多功能,可檢測紫外吸收光譜,圓二色光譜,總熒光譜,光散色譜, 線(xiàn)二色譜及熒光各相異性譜。圓二色光譜主要用于手性光學(xué)活性物質(zhì)的研究??捎糜谟袡C立體化學(xué)研究、光學(xué)活性物質(zhì)純度測試、藥物定量分析、天然有機化學(xué)、生物化學(xué)與宏觀(guān)大分子、金屬絡(luò )合物化學(xué)、聚合物化學(xué)、蛋白質(zhì)折疊研究、蛋白質(zhì)構象研究、物理化學(xué)等。

4. 橫電磁波,是一種在各個(gè)方向上振動(dòng)的射線(xiàn)。其電場(chǎng)矢量E 與磁場(chǎng)矢量H 相互垂直,且與光波傳播方向垂直。由于產(chǎn)生感光作用的主要是電場(chǎng)矢量,一般就將電場(chǎng)矢量作為光波的振動(dòng)矢量。光波電場(chǎng)矢量與傳播方向所組成的平面稱(chēng)為光波的振動(dòng)面。若此振動(dòng)面不隨時(shí)間變化,這束光就稱(chēng)為平面偏振光,其振動(dòng)面即稱(chēng)為偏振面。

5. 平面偏振光可分解為振幅、頻率相同,旋轉方向相反的兩圓偏振光。其中電矢量以順時(shí)針?lè )较蛐D的稱(chēng)為右旋圓偏振光,其中以逆時(shí)針?lè )较蛐D的稱(chēng)為左旋圓偏振光。兩束振幅、頻率相同,旋轉方向相反的偏振光也能夠合成為1束平面偏振光。如果兩束偏振光的振幅(強度) 不相同,則合成的將是1束橢圓偏振光。 
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